禽流感H5N1（2.3.4.4b）病毒引发了全球范围内的动物流行，且意外地在奶牛中爆发了广泛的疫情，因此构成了大流行威胁。为了制定控制策略，关键在于确定适应牛细胞的潜力是H5N1病毒的普遍特征，还是特异于2.3.4.4b类群的病毒，或仅限于该类群内的某些基因型。利用代表>60年H5N1历史的重组病毒及其他IAV进行比较，我们证明牛细胞的复制适应度在2.3.4.4b基因型间差异很大，（ii）在该演化群全球扩展之前的病毒中具有限制，（iii）由内部基因盒决定，（iv）不限于乳房上皮细胞。PB2聚合酶亚基的突变成为适应的关键决定因素，尽管其表型效应依赖于具体情境。牛B3.13及部分鸟类基因型表现出牛干扰素诱导抗病毒反应的增强调节，这一点至少由PB2、核蛋白和非结构蛋白NS1决定。我们的结果凸显了IAV宿主范围的多基因特性，并揭示了牛细胞的复制适应度及其可能对牛的适应潜力，在H5N1病毒的进化轨迹中变化显着。