設計帶有BsmBI、BsaI或AarI酶切位點的引物，用RTPCR擴增H9N2亞型禽流感病毒（AIV）的8個基因全長片段。克隆人雙向轉錄／表達載體pHW2000，並在PB2、PB1和NA基因中共引入了3個沉默突變標簽。將其2個表面基因（HA和NA基因）加上任意1個內部基因，而其它5個內部基因來自A／WSN／33，進行了6種3＋5組合形式的基因重排，把相應組合的轉錄／表達質粒共轉染COS-1細胞，均產生了預期組合、有感染性的H9N2亞型流感病毒，表明親緣關系遙遠的流感病毒可以互相獲取基因片段產生重組病毒，提示表面結構基因和單個內部基因不足以限制H9N2 AIV在哺乳動物細胞上的宿主範圍，同時也驗證了構建的8個轉錄／表達載體均能有效工作，為進一步研究H9N2亞型AIV基因結構與功能、AIV與宿主之間的關系打下了基礎。

H9N2禽流感病毒反向遺傳系統轉錄／表達載體的構建和驗證.pdf