目的流感病毒非結構蛋白1(nonstructural protein 1，NS1)抑制幹擾素調節因子(interferon regulatory factors，IRF)3的機制未明，TANK結合激酶1(TANK-binding kinase 1，TBK-1)能使IRF-3活化，研究NS1是否對TBK-1有抑制作用。方法亞克隆IRF-3、NS1和TBK-1至pcDNA3．1-flag構建flag-IRF-3、flag-NS1和flag-TBK-1質粒；用TBK-1對TBK-1+NS1以及IRF-3+TBK-1對IRF-3+TBK-1+NS1兩組實驗，分別共轉染人胚胎腎上皮293細胞，用抗flag抗體作Western blot分析，鑒定IRF-3、NS1和TBK-1的表達，觀測NS1對TBK-1活化IRF-3的抑制作用；熒光素酶功能分析方法觀測NS1對TBK-1誘導的幹擾素p(IFN-β)啓動子-pGL-2B熒光素酶活性的影響。結果IRF-3、NS1和TBK-1均有高表達。TBK-1能使IRF-3活化，Western blot分析顯示：TBK-1轉染的細胞出現遷移較慢的IRF-3Ⅲ和Ⅳ型，NS1共轉染可使IRF-3Ⅲ和Ⅳ型幾乎消失；熒光素酶功能分析顯示，NS1能抑制TBK-1活化內源性IRF-3所誘導的IFN-β啓動子活性，約爲對照組的1，4，TBK-1+IRF-3共轉染可使IFN-β啓動子活性增高近1000倍，NS1可使TBK-1活化外源性IRF-3所誘導的IFN-β啓動子的活性降至對照組的約1／2至1／3。結論流感病毒NS1可抑制TBK-1所致的IRF-3活化，功能分析提供了NS1顯著抑制TBK-1誘導的IFN-β啓動子活性的證據，首次闡明了流感病毒NS1抑制IRF-3因而抑制幹擾素β産生的機制之一是通過TBK-1信號通路所取得，爲新的抗病毒治療及新藥開發戰略提供了基礎。
流感病毒非結構蛋白對TBK-1的抑制作用.pdf