根據GenBank中登錄的豬流感病毒參照序列設計了擴增神經氨酸酶(NA)基因的特異性引物。從豬流感病毒A／Swine／Inner Mongolia／547／01(H3N2)株感染的雞胚液中直接提取病毒RNA，經RT-PCR擴增後將其克隆到pMD18-T載體上，進行序列測定和拼接。用Hindm酶切後，亞克隆到杆狀病毒轉移載體pMelBacB上，得到重組轉移載體pMelBacNA，然後與線性化杆狀病毒DNA(Bac—N—Blue^TM DNA)共轉染于Sf9昆蟲細胞。經3輪噬斑純化，提取其DNA經PCR鑒定，獲得重組杆狀病毒株。SDS-PAGE結果顯示，目的基因已獲得表達，Western blot和神經氨酸酶活性檢測結果顯示表達産物具有良好的免疫原性和神經氨酸酶活性，爲SIV亞單位疫苗和NA基因的深入研究奠定了基礎。
豬流感病毒A／Swine／Inner Mongolia／547／01分離株神經氨酸酶基因的克隆及真核表達.pdf