根據禽流感病毒H5、H9亞型的HA基因序列，設計了兩對RT-PCR引物，同時對H5、H9亞型進行了多重RT-PCR擴增，得到了兩條清晰的目的帶。將目的帶回收並進行測序，同源性比較結果證明其爲禽流感H5、H9亞型的HA基因序列，作者對多重RT-PCR進行反應條件優化以及敏感性與特異性測定，證明該方法的敏感性和特異性都比較好。初步應用于30份臨床病料，其檢測結果與病毒的分離培養一致，比電鏡和瓊擴的檢出率高，與其他NDV、1BV的病料無交叉反應，可用于禽流感病毒H5、H9亞型的鑒別診斷。