自2020年出現以來，2.3.4.4b H5N1高致病性禽流感病毒（HPAIV）已在全球傳播，導致野生鳥類和家禽的大量感染和死亡。此外，哺乳動物中也發生了大量溢出事件，包括大規模死亡和零星人類感染。此類事件可能促使哺乳動物適應性突變的獲得，進一步增加對人類的風險;最為明確的突變是聚合酶堿性2蛋白（PB2-627K）中穀氨酸轉賴氨酸在氨基酸位置627的位置。在禽流感病毒中，PB2-627K增強哺乳動物細胞中的聚合酶活性和複制，增加了人畜共患病和大流行風險。然而，生物信息學分析表明，PB2-627K在2.3.4.4b類群中仍然罕見，這些病毒在鳥類群體中流行。本研究中，我們研究了PB2-627K對鳥類宿主病毒適應度的影響，以評估哺乳動物適應性病毒在鳥類中重新建立的潛力，模擬鳥類在哺乳動物物種上被清除後感染的潛力，而PB2-627K已出現。利用具有代表性的H5N1病毒（歐洲AB基因型），PB2-627K在不影響鳥類細胞複制的前提下，提高了聚合酶活性和複制能力。一種來自狐狸的哺乳動物衍生PB2-627K H5N1分離株，在雞和鴨中表現出與PB2-627E病毒近緣的複制動力學和傳播效率相當。值得注意的是，PB2-627K在兩種鳥類宿主感染和傳播後，均保持遺傳穩定，達到共識水平。這些發現表明，在溢出過程中獲得的哺乳動物適應性突變可以在鳥類種群中保持，這可能提高人畜共患風險，並凸顯了對鳥類此類突變進行監測的重要性。