自2020年出現以來，H5N1譜系2.3.4.4b已發現多種基因型，其中B3.13和D1.1在美國成為兩種主要且值得關注的基因型。然而，它們在哺乳動物中的相對致病性和傳播性尚未完全闡明。我們比較了德克薩斯州由B3.13（A/Texas/37/2024; HPhTX B3.13）和路易斯安那州由D1.1（A/Louisiana/12/2024; HPhLA D1.1）引發的首批兩例人類H5N1譜系2.3.4.4b感染病例在感染與傳播雪貂模型中的致病性和傳播性。HPhTX B3.13感染導致更嚴重的臨床症狀和增強的病毒脫落，與HPhLA D1.1相比，其傳播性證據更為明顯。組織病理學分析顯示，感染HPhTX B3.13的動物肺部病變更為廣泛，這與病毒載量升高和炎症反應加劇相一致。重要的是，兩種基因型在針對候選疫苗病毒（CVV）株誘導的雪貂血清反應性、受體結合特性、神經氨酸酶（NA）活性及熱穩定性方面均無顯著差異。全基因組測序結果表明，HPhTX B3.13在感染或傳播過程中未出現適應性突變。相比之下，HPhLA D1.1在感染的雪貂中迅速獲得了哺乳動物適應性突變E627K，並在唯一死亡的接觸動物中同時出現了E627K和Q194K突變。這兩種突變均與聚合酶活性增強有關，計算分析表明它們可增強與哺乳動物宿主因子ANP32A和B的相互作用。我們的研究結果表明，B3.13已充分適應哺乳動物的感染和傳播，而D1.1則通過快速獲得適應性突變保留了進化潛力，這突顯了與人畜共患病風險評估和大流行防備相關的重要基因型特異性差異。