近期HPAI A(H5N1) 2.3.4.4b 分支病毒在美國奶牛中的出現和傳播，表明其能夠適應新的哺乳動物宿主。盡管多種A(H5N1)基因型已導致人類感染，但目前僅在牛中檢測到兩種2.3.4.4b分支基因型（B3.13和D1.1），提示存在分支或基因型特異性的嗜性。了解這些病毒在人體氣道和牛乳腺上皮細胞中的複制機制，對於評估病毒進化、哺乳動物適應性及相關公共衛生風險十分重要。在本研究中，我們對感染代表B3.13、D1.1和B3.2基因型的人源A(H5N1) 2.3.4.4b分支分離株、一株A(H5N1) 1分支病毒及一株A(H1N1)pdm09病毒的人的支氣管上皮細胞（Calu-3）和牛乳腺上皮細胞（MAC-T）進行了複制動力學及免疫基因表達特征的研究。所有病毒在Calu-3細胞中均能高效複制，盡管在33°C下的複制相比37°C有所延遲。2.3.4.4b亞群病毒在Calu-3細胞中誘導了中等水平的I型幹擾素和促炎反應，但其水平低於A(H1N1)pdm09和A(H5N1)第一亞群株。2.3.4.4b亞群各基因型在MAC-T細胞中的複制和免疫激活表現出顯著差異。B3.13病毒達到了更高的病毒滴度，並觸發了比其他A(H5N1)基因型或亞群更強的先天免疫應答基因誘導。這些發現表明，複制和宿主反應存在基因型和細胞類型特異性差異，B3.13在牛乳腺細胞中表現出增強的嗜性，提示其適應性可能提高人畜共患風險。我們的結果強調了在不同宿主細胞類型和多樣病毒分離株之間進行比較研究的價值，以為新興流感病毒的風險評估提供參考。
重要性
甲型流感病毒通過多種因素跨越物種屏障，包括與易感細胞結合並感染、有效複制以及調節宿主免疫反應的能力。自2024年以來，A(H5N1) 2.3.4.4b譜系病毒持續進化，感染包括美國牛在內的廣泛禽類和哺乳動物物種，並導致零星人類感染。在本研究中，我們評估了一組從人類分離的A(H5N1) 2.3.4.4b譜系病毒，以評估其在兩種相關哺乳動物細胞類型中的複制能力和宿主反應：人支氣管上皮細胞和牛乳腺上皮細胞。雖然所有基因型在人體支氣管上皮細胞中都能高效複制，但只有B3.13病毒在牛乳腺上皮細胞中表現出強效複制和廣泛的宿主反應誘導。這些結果強調了A(H5N1) 2.3.4.4b譜系病毒在進化、組織嗜性和宿主適應性方面的差異，並突顯了持續監督的必要性。這些結果強調了A(H5N1) 2.3.4.4b分支病毒在進化、組織嗜性和宿主適應性方面的差異，並凸顯了對B3.13基因型病毒持續監測和密切關注的必要性。