禽流感A（H9N2）病毒在家禽中廣泛傳播，偶爾感染哺乳動物，為其他新興毒株提供基因。使這些病毒能夠承受更高溫度的因素尚不清楚。在這項研究中，我們使用了飽和H9N2血凝素（HA）突變體庫的高溫選擇和深度突變掃描。我們鑒定了三種HA突變，S84F、G167N和D168N，它們增加了病毒的熱穩定性。帶有這些突變的病毒在高溫下存活得更好。在雞的傳播實驗中，S84F突變允許在阻斷野生型病毒傳播的溫度下通過水傳播。在兩個實驗重複中的一個中，所有三種突變的組合都與空氣傳播的證據有關。這些結果將HA熱穩定性與熱應激下的環境持久性和傳播潛力聯系起來，這可能會影響H9N2病毒的生態。