2025年12月，在荷蘭一家奶牛場發現一只貓感染了高致病性禽流感（HPAI）H5N1亞型2.3.4.4b基因型DI.2.1病毒。對荷蘭奶牛的乳汁和血清樣本進行了禽流感病毒檢測，未檢測到病毒RNA；但在72頭荷蘭泌乳奶牛中有34頭（47.2%）、38頭荷蘭幼齡牛中有24頭（63.2%）的血清樣本中檢測到了H5N1特異性抗體。這表明高致病性禽流感H5N1在歐洲的哺乳動物宿主範圍正在擴大。
自2024年3月以來，美國（US）發生了大規模的高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒爆發。相比之下，尚無報告與歐洲基因型DI.2.1相關的乳牛感染HPAI H5N1的證據。這裏介紹了一項病例調查和農場層面調查，該調查首次在歐洲乳牛中檢測到針對HPAI H5N1的抗體。
2025年12月24日，采集並提交了一只生活在奶牛場的4個月大家貓的鼻腔、直腸和結膜拭子樣本，該貓表現出臨床症狀，包括嗜睡和呼吸症狀，符合HPAI病毒感染。貓兩天後去世了。三份拭子樣本均通過RT-qPCR檢測出甲型流感病毒陽性，並通過Illumina全基因組測序確定該病毒為HPAI H5N1演化系2.3.4.4b基因型DI.2.1。系統發育分析顯示，自2025年10月以來，該病毒與與歐洲野生和家禽爆發相關的HPAI H5N1病毒聚集。
在貓體內檢測到的HPAI H5N1病毒不含PB2 M631L取代反應，而該病毒在美國B3.13基因型中常被報道感染乳牛。PB2 E627K替代，作為哺乳動物適應性的一個明確特征標志，也存在。此外，檢測到PB2 I292V取代，該替代在早期歐洲HPAI H5N1病毒中很少見，但現在主要在DI基因型中被鑒定。貓序列中未發現其他已知影響毒力、宿主特異性或宿主蛋白結合的遺傳標記。
在貓體內檢測到HPAI H5N1病毒後，同一農場的奶牛進行了禽流感病毒和抗體檢測，作為流行病學調查的一部分。2026年1月15日，采集了20個獨立牛奶樣本（四個乳房四分之一的中遊牛奶）和一個散裝牛奶箱樣本。通過針對基質基因的RT-qPCR檢測到任何牛奶樣本中未檢測到病毒RNA。然而，在9個單獨的牛奶樣本和含有核蛋白（NP）-ELISA的散裝牛奶樣本中檢測到了針對甲型流感病毒的抗體。

2026年1月22日，對農場進行了重訪：從所有哺乳奶牛中采集了單獨的牛奶（n=70）和血清（n=72）樣本，以及38頭1-2歲幼牛的血清樣本（見表）。在本次農場級調查中，所有牛奶和血清樣本均采用NP-ELISA、H5-ELISA（ID Influenza Screen H5 Indirect ELISA， ID）及血凝抑制（HI）檢測，針對兩種H5抗原LPAI H5N1 A/雞/NL-Swifterband/14002541/2014（EPI_ISL_176754）和HPAI H5N8 A/chicken/Netherlands/20016597-026030/2020 （EPI_ISL_603132），均依據世界動物衛生組織（WOAH）陸地手冊，使用八個血凝單位。所有檢測到NP-ELISA抗體的樣本（除一個牛奶樣本外，因材料不足）隨後通過病毒中和試驗（VNT）檢測，使用Madin-Darby犬腎細胞和2.3.4.4b H5N1病毒（H5N1 A/Chicken/Netherlands/21037287-006010/2021，EPI_ISL_5588100）。由歐盟禽流感參考實驗室提供的牛血清樣本（A/turkey/Italy/21VIR9520-3/2021 H5N1亞型，BPL滅活HPAI病毒，一種由威尼斯實驗動物動物研究所生產的高濃度抗原），內含針對H5類群2.3.4.4b的抗體，作為陽性對照。
如果NP-ELISA和VNT均呈陽性，則該樣本被視為陽性。病毒中和測試結果幾乎證實了所有NP-ELISA陽性結果。任何牛奶樣本中均未檢測到HI滴度，而在72個哺乳奶牛血清樣本中測得11個（15.3%）檢測到HI滴度，38個幼牛樣本中有3個檢測到HI滴度。HI滴度範圍為10到40。在八個具有最高VNT滴度的血清樣本中，利用基於Luminex技術和ProteinAG偶聯的多重血清學檢測法，鑒定出針對H5和N1的抗體。綜上，在72頭泌乳奶牛中的34頭（47.2%）和38頭幼牛中的24頭的血清樣本中檢測到針對H5N1的抗體。在70頭奶牛中的14頭（20.0%）的牛奶樣本中檢測到抗體。