高致病性禽流感A(H5N1)病毒對牛乳腺表現出強烈的嗜性，這挑戰了我們對甲型流感病毒宿主範圍和組織特異性的理解。我們在泌乳期乳牛中使用甲型流感A(H5N1) B3.13基因型病毒進行了實驗研究，以確定感染劑量、暴露途徑以及與發病率和死亡率相關的因素。在此，我們證明，即使通過乳腺內接種僅10 TCID50，也能建立強烈的感染，並在乳汁中釋放高滴度病毒。盡管感染劑量很低，H5N1病毒並不容易通過被汙染的擠奶設備或與感染動物的密切接觸傳播。高劑量乳腺內暴露會導致嚴重疾病和死亡，而呼吸道和口腔暴露則較不容易建立有效感染及相關發病。這項研究對目前關於H5N1在奶牛場傳播的假說提出了挑戰，並引發了關於可能的病原體、宿主或環境共同因素如何促成病毒傳播的重要問題。