自2024年3月起，美國奶牛中檢測到H5N1高致病性禽流感（HPAI）。未經巴氏殺菌的牛奶中排泄的傳染性病毒（此前尚未評估其作為H5N1檢測基質的有效性）使得實時逆轉錄定量聚合酶鏈式反應（rRT-qPCR）檢測成為動物診斷和食品安全篩查及早期發現的關鍵手段。本次實驗室間比對試驗評估了基於聚合酶鏈式反應（PCR）的H5N1檢測方法的性能，采用45家政府、學術及商業實驗室參與，使用添加了滅活H5N1病毒培養物的盲樣牛奶，病毒濃度範圍為每100微升85至17萬基因組拷貝。參與者依據常規規程檢測樣本。采用按提取與PCR試劑盒組合分組的方法，分析檢出率（ROD）、Ct值及50%樣本呈陽性時的檢測限（LOD50），以比較靈敏度差異。對於高濃度樣本（17,000和170,000拷貝/100微升），檢出率（ROD）≥99%；然而，低濃度樣本的檢出率顯著下降，僅34%的參與者能在1,700拷貝/100微升的樣本中可靠檢出，而85拷貝/100微升的樣本僅24%能被檢出。參與者采用了八種不同的檢測方法，其中部分方法能穩定檢出低濃度病毒，而其他方法在低拷貝量下則完全無法檢出。本研究揭示了各實驗室在H5N1檢測能力上的顯著差異，方法選擇直接影響靈敏度。這一發現對人類與動物健康監測及應急響應具有重要啟示，凸顯了評估H5N1牛奶檢測方案及質量控制措施的必要性。