2020年高致病性禽流感H5N1（2.3.4.4b）全動物分支的出現標志著甲型流感病毒（IAV）宿主範圍的大幅擴大，引發了人們對進一步跨物種傳播事件和人畜共患溢出的擔憂。將2.3.4.4b病毒引入美國奶牛群導致了廣泛的傳播，伴隨著牛奶產量下降、乳腺炎和牛奶中的高病毒載量。值得注意的是，奶牛中的病毒傳播代表了哺乳動物適應和傳播的新途徑，自2024年以來，該途徑已導致美國40多例人類病例。在這裏，我們研究了禽支2.3.4.4b病毒是否可以感染阿伯丁安格斯牛、荷斯坦-弗裏西亞牛和利木贊牛的乳腺組織，這三個品種通常在歐洲、美洲和大洋洲養殖。使用乳腺外植體，我們用表達三種2.3.4.4b病毒血凝素和神經氨酸酶糖蛋白的減毒重組病毒接種組織，這些病毒早於H5N1在美國牛中出現：A/雞/英格蘭/053052/2021（AIV07）、A/雞/蘇格蘭/054477/2021（AIV09）和A/雞/英國/085598/2022（AIV48）。在感染AIV09和AIV48後，使用免疫組織化學在所有三個品種的乳頭和腺池的外植體中鑒定出受感染的上皮細胞，表明三個受試牛種中的每一個的乳腺組織都允許H5N1感染。凝集素染色顯示，所有供體的乳腺組織中都表達了α2,3連接和α2,6連接的唾液酸，這表明所有三個品種都有可能支持鳥類和哺乳動物適應的IAV的感染。總之，這些發現表明，來自肉牛和奶牛品種的乳腺都可以感染適應鳥類和哺乳動物的H5N1病毒，並強調了這種組織作為IAV重組混合容器的潛力，強調了將牛納入持續的H5N1監測和風險評估框架的必要性。