.3.4.4b類H5Nx高致病性禽流感病毒（HPAIV）在全球家禽中引起了廣泛的爆發。H5高致病性禽流感病毒在中國引起了零星但嚴重的人類感染，構成了持續的人畜共患威脅。在這裏，我們通過常規監測確定了一種鴨源H5N6 HPAIV（a/duck/Jiangsu/628/2022），並評估了其生物學特征和哺乳動物發病機制。系統發育分析顯示，毒株628與同時存在的人類H5N6毒株A/揚州/125/2022之間的核苷酸同源性>98%。分子特征鑒定了多種哺乳動物適應標志物：與增強的人類受體結合相關的血凝素替代（S137A、T160A、T192I）；神經氨酸酶突變（I117T、D198N）與神經氨酸酶抑制劑敏感性降低有關；以及聚合酶複合物變化（PB1-D622G、PA-K142Q）導致哺乳動物細胞複制增加。體外研究表明，628病毒在哺乳動物細胞中的複制比在鳥類細胞中更有效，並表現出雙重受體結合特異性。小鼠致病性檢測顯示，其毒性中等，肺部病理學呈進行性。關鍵的是，傳播實驗證實了628在豚鼠身上的直接接觸和空氣傳播能力。這些發現表明，循環中的H5N6病毒在保持鳥類適應性的同時獲得了部分哺乳動物適應性，顯著提高了大流行的可能性。迫切需要加強對野生鳥類種群、家禽養殖場和活禽市場的監測，以制定有效的預防和控制策略。