高致病性H5N1禽流感病毒在哺乳動物間的持續傳播正重塑這些病原體的宿主範圍。其中最長持續的哺乳動物傳播鏈涉及2024年初在美國乳牛中發現的B3.13基因型。基因組分析顯示血凝素突變D104G和V147M的正向選擇與快速固定。通過糖組學分析，我們證實牛組織（包括乳腺）富含以N-糖基神經氨酸酸（NeuGc）封頂的N-和O-連接聚糖，而NeuGc是人類和鳥類中缺失的唾液酸，它們僅表達N-乙酰神經氨酸酸（NeuAc）。早期牛H5病毒很難識別NeuGc，但D104G和V147M能夠有效地結合含NeuAc和NeuGc的受體。這些突變增強了牛乳腺組織中的複制，而沒有顯著減弱人肺和原代鼻上皮細胞中的複制。因此，NeuGc驅動的受體適應促進了牛的病毒適應性，同時可能限制了直接的人畜共患風險。深度突變掃描進一步確定了賦予NeuGc使用的替代血凝素替代品，並代表了新興牛H5譜系的監測標志。