H5N1亞型高致病性禽流感病毒（HPAIV）對動物和公共衛生構成重大威脅。目前H5進化枝2.3.4.4b的泛動物病已經在各種家禽和野生鳥類中引起了大量廣泛的爆發，死亡率高，損失巨大，並且對奶牛等意外的新型哺乳動物宿主的溢出事件頻率很高。全球H5N1疫情引起了人們對哺乳動物間有效傳播導致的人畜共患風險的嚴重擔憂。因此，提高擴大物種範圍的監測強度至關重要，特別是在人-動物界面。為此，迫切需要易於執行且適合高通量篩查的可靠且具有成本效益的血清學工具。采用基於發光的檢測技術的新開發的雙抗原ELISA格式已證明符合這些先決條件。該測定法允許在包括人類在內的多種鳥類和哺乳動物感染或接種疫苗後早期檢測H5特異性抗體。它進一步證明了針對進化枝2.3.4.4b的H5血凝素的抗體具有優異的分析靈敏度和高特異性，因為未觀察到與其他血凝素亞型的交叉反應。因此，該測定代表了對現有血清學診斷測試的有價值的貢獻，用於在廣泛物種中對甲型流感病毒抗體進行進化枝優化檢測。