美國農業部通過全基因組序列證實首次在奶牛中檢測到HPAI H5N1進化枝2.3.4.4b基因型D1.1。雖然基因型D1.1是北美候鳥中流行的主要毒株，但內華達州病例代表了首次在牛中檢測到B3.13以外的基因型，以及第二次已知的野生鳥類向泌乳奶牛的溢出事件。D1.1與HPAI B3.13相比，內華達州和亞利桑那州奶牛群的臨床表現較輕。然而，這是基於少數受影響的牛群，對於更廣泛的人群來說可能不是這樣。在這裏，我們試圖通過實驗複制HPAI H5N1基因型D1.1的奶牛感染。並試圖確定自然感染HPAI B3.13後血清抗體的牛是否受到HPAI D1.1再感染的保護。將四頭成年荷斯坦奶牛轉移到ABSL-3-Ag生物安全實驗設施中，兩只奶牛沒有感染甲型流感病毒；另兩只奶牛沒有感染甲型流感病毒，但血清抗體來自天然H5N1感染（基因型B3.13）。所有奶牛通過乳房內途徑接種1毫升1×105.4 TCID50/毫升A/奶牛/內華達州/24-002644-003/2025到兩個對側。在這項研究中觀察到的產奶量和反刍的下降與HPAI B3.13泌乳奶牛的實驗性乳房內攻擊以及自然感染中報道的相似，表明HPAI D1.1的臨床表現在嚴重程度上與HPAI B3.13的實驗性攻擊相似。與HPAI B3.13乳房內挑戰不同，HPAI D1.1遷移並感染了未接種的四分之一。這兩頭B3.13恢複期奶牛很容易再次感染D1.1，表現出臨床症狀，包括產奶量下降和反刍，發熱和乳腺炎。然而，兩頭恢複期奶牛的產奶量和瘤胃運動恢複得比兩頭初生奶牛更快，發熱也不那麼嚴重。在10 DPI後，在恢複期奶牛的牛奶中也未檢測到病毒RNA，而在研究期間，在普通奶牛的牛奶中檢測到了病毒RNA。此外，雖然在兩只恢複期奶牛的牛奶中檢測到病毒RNA，但沒有分離出活病毒。雖然有血清但沒有針對B3.13的牛奶抗體的恢複期奶牛很容易再次感染D1.1，而臨床疾病抗體可以滲入牛奶並結合病毒，可能會阻止整個牛群的進一步傳播。從以前未感染的奶牛的牛奶中回收的全基因組序列病毒的單核苷酸變異分析也發現了一些潛在的重要模式。發現HA和MP基因具有強有力的自然選擇證據，分析表明，通過一些可能導致抗原漂移和免疫逃逸的關鍵突變賦予了適應性優勢。