為了研究中國江蘇省流行的H3N2犬流感病毒的分子特征，我們在南京農業大學獸醫教學醫院從一只出現呼吸道症狀的狗中分離出一株H3N2毒株（a/canine/Nanjing/CnNj01-2025）。對所有八個基因片段進行測序，並與兩個人類H3N2菌株和五個禽類H3N2菌株的基因片段進行比較。還評估了抗原性和受體結合特性。系統發育分析表明，犬分離株來自禽類譜系並形成獨立的進化進化進化枝，而人類毒株與禽類譜系的親緣關系更遠。HA蛋白的糖基化分析表明，犬品系攜帶7個N-糖基化位點，包括殘基97/81（HA/H3編號）的獨特位點，其作為犬品系的分子標記。在主要抗原位點鑒定出幾個氨基酸取代，包括D97/81N，A176/160T，N204/188D，V212/196I和W237/222L。內部基因分析表明，犬株攜帶PB2 292T和590S哺乳動物適應突變，這些突變也存在於人類品系中。犬株的血凝抑制（HI）測定表明與人H3N2抗血清具有中等的血清學交叉反應性（減少16倍），而禽株則沒有交叉反應性。受體結合試驗表明，該病毒保留了主要的α-2,3唾液酸結合，與禽流感病毒相當，並且對人型α-2,6唾液酸受體具有適度的親和力。因此，犬H3N2病毒經曆了顯著的抗原漂移，與人類菌株產生了部分血清學交叉反應，並獲得了對人類受體的可檢測但有限的結合親和力。總體而言，我們的研究結果表明，目前的犬H3N2流感病毒表現出與人和禽流感病毒株不同的遺傳和抗原變異。因此，有必要對犬流感病毒進行持續的分子和血清學監測，以監測其進化趨勢並評估跨物種傳播的潛力。