高度致病性禽流感H5N1在2024年3月以來，隨著其在乳牛及相關人類感染中溢出，帶來了日益增長的公共衛生風險。我們系統地識別了在鳥類傳牛過程中出現的關鍵PB2突變及其後續適應，尤其是PB2 M631L，其致病性在小鼠中與經過充分描述的PB2 E627K突變相當。回顧性分析顯示，PB2 631L在2013-2014年柬埔寨和越南的H5N1病毒株中也曾在禽類和人類H5N1株中流行。其他適應性突變還包括已建立的標志物（E627K、Q591R、D701N）和新型變異（I647V、G685R、K736R）。這些突變通過改善牛和人類ANP32A蛋白的利用，增強聚合酶活性，從而提升哺乳動物的病毒適應性和致病性。這些適應的彙聚凸顯了牛適應型H5N1病毒人畜共患風險的升高，並凸顯了對禽類和哺乳動物宿主加強監測的緊迫需求。