禽流感H5N1（2.3.4.4b）病毒引發了全球範圍內的動物流行，且意外地在奶牛中爆發了廣泛的疫情，因此構成了大流行威脅。為了制定控制策略，關鍵在於確定適應牛細胞的潛力是H5N1病毒的普遍特征，還是特異於2.3.4.4b類群的病毒，或僅限於該類群內的某些基因型。利用代表>60年H5N1曆史的重組病毒及其他IAV進行比較，我們證明牛細胞的複制適應度在2.3.4.4b基因型間差異很大，（ii）在該演化群全球擴展之前的病毒中具有限制，（iii）由內部基因盒決定，（iv）不限於乳房上皮細胞。PB2聚合酶亞基的突變成為適應的關鍵決定因素，盡管其表型效應依賴於具體情境。牛B3.13及部分鳥類基因型表現出牛幹擾素誘導抗病毒反應的增強調節，這一點至少由PB2、核蛋白和非結構蛋白NS1決定。我們的結果凸顯了IAV宿主範圍的多基因特性，並揭示了牛細胞的複制適應度及其可能對牛的適應潛力，在H5N1病毒的進化軌跡中變化顯著。