甲型流感病毒（IAV）的有效複制需要血凝素（HA），神經氨酸酶（NA）和RNA聚合酶複合物的平衡活性，其功能受PB2突變的強烈影響。我們之前揭示了PB2突變的三種不同的進化途徑，其中兩種途徑導致出現導致人類季節性感染和2009年大流行的病毒株，第三種途徑產生H5Nx高致病性禽流感病毒（HPAIV），由三聯突變（I147T，K339T和A588T）定義，偶爾會擴散到人類。在這裏，我們調查了這種三聯征造成的人畜共患風險，並闡明了其與HA，NA和疫苗接種的進化關系。攜帶三聯體的重組PR8和進化枝2.3.2.1c H5N1病毒在含胚雞蛋中有效複制，在哺乳動物細胞中具有中等複制效率；此外，與攜帶E627K的菌株感染的小鼠相比，感染這些病毒株的小鼠表現出較輕的體重減輕和較低的肺滴度。H5Nx病毒的序列分析顯示，三聯征在不同基因型中的早期出現和長期持續存在，這與HA糖基化和NA莖截短密切相關。然而，在連續的H5家禽疫苗接種運動之後，這些病毒株的流行率顯著下降。這些數據表明，三聯征提供了與家禽和哺乳動物宿主兼容的複制優勢，但僅賦予中等程度的哺乳動物致病性，並且持續接種疫苗可以抑制具有這些突變的病毒株的傳播。PB2與HA和NA的持續分子監測對於預防H5Nx人畜共患威脅仍然至關重要。