高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒對全球健康構成越來越大的威脅，特別是在其前所未有的蔓延到奶牛並隨後傳播到18個州的1000多個奶牛場之後。這項研究調查了在不同哺乳動物細胞系（MDCK，MDBK，A549，Vero，MV1）中存在和不存在生乳的情況下，宿主細胞對不同H5N1毒株（牛和水貂衍生的H5N1）的反應。我們的研究結果表明，牛源性H5N1毒株比水貂源性H5N1毒株表現出更強大的複制能力，並證明了宿主內病毒的進化，並通過深度測序檢測到新出現的氨基酸替代。盡管生乳補充劑不能直接增強體外病毒複制，但它顯著調節宿主基因表達，通常會抑制關鍵的抗病毒幹擾素刺激基因（ISG）反應，並破壞基本的宿主細胞過程，如細胞內運輸和唾液酸生物合成。這些宿主基因調節是細胞類型和菌株特異性的，表明理論上可能影響病毒-宿主動力學的複雜相互作用，盡管這些體外觀察的生物學意義需要通過感染性病毒測定和體內研究進行驗證。這項產生假設的工作提供了對H5N1牛奶相互作用的初步見解，強調需要進一步的機制研究，以評估乳制品環境中病毒傳播的潛在影響。