歐亞禽流感樣H1N1豬流感病毒（EA H1N1）與人類大流行2009 H1N1病毒（2009/H1N1）之間的抗原關系仍然是流感監測和疫苗效力的關鍵問題。本研究系統地研究了毒株A/豬/天津/312/2016（TJ312，EA H1N1）和A/廣東茂南/SWL1536/2019（GD15362009/H1N1）之間的抗原差異。交叉血凝抑制（HI）測定顯示出顯著的抗原差異，異源與同源HI滴度降低了16倍。比較序列分析確定了HA1亞基的五個主要抗原位點（Sa，Sb，Ca1，Ca2和Cb）之間的22個氨基酸差異。使用反向遺傳學，產生了一組突變病毒。這項研究表明，Sa抗原位點殘基128（H3編號）處的單個組氨酸（H）-天冬酰胺（N）取代是抗原變異的主要決定因素，足以引起HI滴度的四倍變化和可測量的抗原距離漂移。通過AlphaFold3和PyMOL軟件進行的結構建模表明，H128N突變可能會改變抗原位點的局部構象。128位的H可能會與相鄰的氨基酸產生靜電排斥，而N可能會促進與相鄰殘基的氫鍵形成。這些相互作用可能會導致抗原位點的結構變化。我們的研究結果證實，殘基128是EA H1N1和2009/H1N1病毒抗原分化的關鍵分子標記。該研究強調了監測特定HA突變的必要性，這些突變可能會降低交叉反應性，並為完善疫苗株選擇和大流行防範策略提供了寶貴的見解。