A/goose/Guangdong/1/96譜系H5N1高致病性禽流感（HPAI）病毒的全球傳播伴隨著宿主範圍的擴大和奶牛之間持續病毒傳播的建立。為了評估進化中的H5N1病毒是否隨著時間的推移改變了組織趨向性，我們比較了來自進化枝1（A/Vietnam/1203/04，H5VN）和循環進化枝2.3.4.4b病毒的重組血凝素（HA）蛋白的結合模式。野生鳥類（A/Eurasian Teal/Hong Kong/AFCD-HKU-23-14009-01020/2023，H5HK）和奶牛（A/bovine/Ohio/B24OSU-439/2024，H5OH）。包括A（H1N1）pdm09病毒的HA蛋白用於比較。使用生物層幹涉法，H1蛋白優先與α2,6連接的唾液酸苷6´SLNLN結合，而H5蛋白優先與α2,3連接的唾液酸苷3´SLN結合。H5OH對3´SLN的結合親和力高於H5HK和H5VN。評估了H1和H5蛋白在不同物種和奶牛乳腺的呼吸組織上的附著模式。與H1蛋白相比，H5蛋白與貓，牛，雞，雪貂，人和豬的肺上皮細胞表現出更強的結合，進化枝2.3.4.4b H5蛋白與豬和牛支氣管上皮細胞的結合增強。所有H5蛋白都附著在乳腺的肺泡和水箱上皮細胞上，其中α2,3連接的和α2,6連接的唾液酸聚糖分別由Maackia amurensis凝集素II和接骨木黑凝集素檢測到。綜上所述，進化枝1和2.3.4.4b H5N1病毒的HA蛋白通常與禽類和哺乳動物組織具有可比的附著模式，盡管在過去的30年中進化成抗原性不同的進化枝。