高致病性禽流感（HPAI）H5N1病毒自1997年以來一直在水鳥中流行，在全球範圍內引起家禽爆發和偶爾的人類感染。最近，H5N1 2.3.4.4b分支的一種新的重組變體在美國的跨物種傳播給牛，加劇了人們對宿主範圍擴大和潛在人類感染的擔憂。由於不可能從其宿主中根除H5N1病毒，因此必須為H5N1衍生株引起的潛在流行病做好准備。利用缺失的NS1減毒流感病毒載體活疫苗系統（DelNS1 LAIV）（我們之前在開發新冠肺炎疫苗時使用的系統），我們基於公開的序列，快速開發了用於牛H5N1和相關分支2.3.4.4b毒株的鼻內疫苗。我們的研究表明，單次鼻內免疫可以有效地抵禦高致病性禽流感牛或水貂H5N1變種的致命攻毒挑戰，在雌性小鼠和雄性倉鼠模型中兩個月後提供強大、持續的免疫力。免疫原性分析表明，DelNS1 LAIV鼻內接種可誘導小鼠產生強烈的中和抗體、粘膜IgA和T細胞反應。進一步評估DelNS1 H5N1 LAIV系統對於為未來可能在人類中爆發的H5N1疫情做好准備至關重要。