美國奶牛中H5N1高致病性禽流感病毒（HPAIV）的意外爆發引發了獸醫和公共衛生方面的重大擔憂。美國何時以及如何將H5N1高致病性禽流感病毒引入奶牛，以及牛感染甲型流感病毒（IAV）的更廣泛流行病學尚不清楚。在此，我們進行了一項回顧性研究，使用針對核蛋白（NP）的酶聯免疫吸附試驗（ELISA）篩查2023年1月至2024年5月從美國不同牛品種收集的1700多頭牛血清樣本，以檢測IAV感染，並通過血凝抑制（HI）試驗對陽性樣本進行了進一步檢測。結果顯示，來自美國15個州的1724個樣本中有586個（33.99%）通過NP ELISA檢測呈血清陽性，其中2024年收集了78個樣本，2023年收集了508個樣本。此外，HI檢測顯示，這些ELISA陽性樣本中有45個對人類季節性H1N1和H3N2以及豬H3N2和H1N2病毒呈陽性，有些對兩到三種測試的IAV呈陽性。令人驚訝的是，這些ELISA陽性樣本中沒有一個對流行的牛H5N1毒株呈HI陽性。我們的研究結果表明，H5N1以外的IAV可以感染牛，感染不僅限於奶牛，而且牛感染豬和人類IAV的情況在H5N1爆發之前就已經發生。所有結果都強調了監測牛體內IAV流行病學的價值，因為這些病毒可能會適應牛和/或與目前流行的H5N1高致病性禽流感病毒重組，從而增加對人類的風險。