歐亞類禽流感（EA）H1N1豬流感病毒（SIV）具有引發下一次流感大流行的能力，因為它對人類α-2,6唾液酸（SA）受體的親和力增強。然而，EA H1N1 SIV受體結合偏好轉換的分子機制仍然難以捉摸。在這項研究中，我們利用EA H1N1 SIV在豬腎細胞中進行了全面的全基因組CRISPR/Cas9敲除篩選。敲除γ-穀氨酰羧化酶（GGCX）通過抑制病毒血凝素（HA）的羧化修飾和子代病毒的粘附來減少病毒在體外和體內的複制，最終阻礙EA H1N1 SIV的複制。此外，GGCX被發現是EA H1N1 SIV D225E替代的決定因素，GGCX藥物化的HA 225E羧化修飾有助於EA H1N1 SIV對α-2,6 SA受體的受體結合適應。綜上所述，我們的CRISPR篩選闡明了GGCX在支持EA H1N1 SIV適應與α-2,6 SA受體結合方面的新功能。因此，GGCX成為對抗EA H1N1 SIV感染和傳播的潛在抗病毒靶點。