2.3.4.4b分支H5N1禽流感病毒正在美國奶牛中引發前所未有的疫情。為了了解最近的H5N1病毒是否正在改變其受體用途，我們使用聚糖微陣列從曆史和最近的2.3.4.4b H5N1病毒中篩選重組血凝素（HA），以結合不同的帶有末端唾液酸的聚糖。我們發現，與曆史和最近的2.3.4.4b H5N1病毒相比，來自A/Texas/37/2024的H5（奶牛疫情中的一種分離株）與攜帶末端α2,3唾液酸的核心聚糖（鳥類受體）的結合寬度增加了。我們沒有觀察到與人類季節性流感病毒使用的受體α2,6唾液酸的任何結合。使用分子動力學和A/Texas/37/2024 H5的低溫EM結構，我們發現與2022年的2.3.4.4b H5相比，A/Texas/37/20024 H5在受體結合位點內更靈活。我們發現受體結合位點外的一個突變T199I負責增加結合寬度，因為它增加了受體結合位點的靈活性。這些數據共同表明，最近的H5N1病毒正在進化增加受體結合寬度，這可能會影響感染H5N1的宿主範圍和細胞類型。