禽流感A（H9N2）病毒在家禽中广泛传播，偶尔感染哺乳动物，为其他新兴毒株提供基因。使这些病毒能够承受更高温度的因素尚不清楚。在这项研究中，我们使用了饱和H9N2血凝素（HA）突变体库的高温选择和深度突变扫描。我们鉴定了三种HA突变，S84F、G167N和D168N，它们增加了病毒的热稳定性。带有这些突变的病毒在高温下存活得更好。在鸡的传播实验中，S84F突变允许在阻断野生型病毒传播的温度下通过水传播。在两个实验重复中的一个中，所有三种突变的组合都与空气传播的证据有关。这些结果将HA热稳定性与热应激下的环境持久性和传播潜力联系起来，这可能会影响H9N2病毒的生态。