根据禽流感病毒H5、H9亚型的HA基因序列，设计了两对RT-PCR引物，同时对H5、H9亚型进行了多重RT-PCR扩增，得到了两条清晰的目的带。将目的带回收并进行测序，同源性比较结果证明其为禽流感H5、H9亚型的HA基因序列，作者对多重RT-PCR进行反应条件优化以及敏感性与特异性测定，证明该方法的敏感性和特异性都比较好。初步应用于30份临床病料，其检测结果与病毒的分离培养一致，比电镜和琼扩的检出率高，与其他NDV、1BV的病料无交叉反应，可用于禽流感病毒H5、H9亚型的鉴别诊断。