自2020年出现以来，2.3.4.4b H5N1高致病性禽流感病毒（HPAIV）已在全球传播，导致野生鸟类和家禽的大量感染和死亡。此外，哺乳动物中也发生了大量溢出事件，包括大规模死亡和零星人类感染。此类事件可能促使哺乳动物适应性突变的获得，进一步增加对人类的风险;最为明确的突变是聚合酶碱性2蛋白（PB2-627K）中谷氨酸转赖氨酸在氨基酸位置627的位置。在禽流感病毒中，PB2-627K增强哺乳动物细胞中的聚合酶活性和复制，增加了人畜共患病和大流行风险。然而，生物信息学分析表明，PB2-627K在2.3.4.4b类群中仍然罕见，这些病毒在鸟类群体中流行。本研究中，我们研究了PB2-627K对鸟类宿主病毒适应度的影响，以评估哺乳动物适应性病毒在鸟类中重新建立的潜力，模拟鸟类在哺乳动物物种上被清除后感染的潜力，而PB2-627K已出现。利用具有代表性的H5N1病毒（欧洲AB基因型），PB2-627K在不影响鸟类细胞复制的前提下，提高了聚合酶活性和复制能力。一种来自狐狸的哺乳动物衍生PB2-627K H5N1分离株，在鸡和鸭中表现出与PB2-627E病毒近缘的复制动力学和传播效率相当。值得注意的是，PB2-627K在两种鸟类宿主感染和传播后，均保持遗传稳定，达到共识水平。这些发现表明，在溢出过程中获得的哺乳动物适应性突变可以在鸟类种群中保持，这可能提高人畜共患风险，并凸显了对鸟类此类突变进行监测的重要性。