最近，H9N2禽流感病毒（AIV）对禽类产业和公共卫生构成了重大威胁。因此，研究其神经氨酸酶突变对神经氨酸酶抑制剂（NAIs）敏感性的影响，对于临床上防止H9N2潜在跨物种传播具有重要意义。在本研究中，我们的结果显示，1998年至2024年间从中国分离的大多数H9N2病毒的NAI耐药相关突变主要发生在N70S、E119A/D/G/V、Q133K、Q136A、D151E、Y155H、I222V、R224K、E276D、R292K、N294S和R371K位点。其中，N70S与Y155H联合突变是近年来流行的H9N2病毒的常见特征。体内实验表明，携带N70S与Y155H联合突变的这些H9N2病毒在未经适应的情况下，对BALB/c小鼠呈现高致病性。体外神经氨酸酶抑制试验证实，这些携带N70S/Y155H突变的H9N2病毒对奥司他韦和扎那米韦的抑制作用降低程度高于仅携带N70S或Y155H单一突变的病毒，但仍对帕拉米韦高度敏感。值得注意的是，神经氨酸酶抑制剂对携带N70S和Y155H复合突变的H9N2病毒的体内保护作用有限，这可能归因于这些药物在改善过度炎症反应方面的能力受限。因此，亟需加强对携带这些突变的H9N2禽流感的流行病学监测和防控策略研究。