近期HPAI A(H5N1) 2.3.4.4b 分支病毒在美国奶牛中的出现和传播，表明其能够适应新的哺乳动物宿主。尽管多种A(H5N1)基因型已导致人类感染，但目前仅在牛中检测到两种2.3.4.4b分支基因型（B3.13和D1.1），提示存在分支或基因型特异性的嗜性。了解这些病毒在人体气道和牛乳腺上皮细胞中的复制机制，对于评估病毒进化、哺乳动物适应性及相关公共卫生风险十分重要。在本研究中，我们对感染代表B3.13、D1.1和B3.2基因型的人源A(H5N1) 2.3.4.4b分支分离株、一株A(H5N1) 1分支病毒及一株A(H1N1)pdm09病毒的人的支气管上皮细胞（Calu-3）和牛乳腺上皮细胞（MAC-T）进行了复制动力学及免疫基因表达特征的研究。所有病毒在Calu-3细胞中均能高效复制，尽管在33°C下的复制相比37°C有所延迟。2.3.4.4b亚群病毒在Calu-3细胞中诱导了中等水平的I型干扰素和促炎反应，但其水平低于A(H1N1)pdm09和A(H5N1)第一亚群株。2.3.4.4b亚群各基因型在MAC-T细胞中的复制和免疫激活表现出显着差异。B3.13病毒达到了更高的病毒滴度，并触发了比其他A(H5N1)基因型或亚群更强的先天免疫应答基因诱导。这些发现表明，复制和宿主反应存在基因型和细胞类型特异性差异，B3.13在牛乳腺细胞中表现出增强的嗜性，提示其适应性可能提高人畜共患风险。我们的结果强调了在不同宿主细胞类型和多样病毒分离株之间进行比较研究的价值，以为新兴流感病毒的风险评估提供参考。
重要性
甲型流感病毒通过多种因素跨越物种屏障，包括与易感细胞结合并感染、有效复制以及调节宿主免疫反应的能力。自2024年以来，A(H5N1) 2.3.4.4b谱系病毒持续进化，感染包括美国牛在内的广泛禽类和哺乳动物物种，并导致零星人类感染。在本研究中，我们评估了一组从人类分离的A(H5N1) 2.3.4.4b谱系病毒，以评估其在两种相关哺乳动物细胞类型中的复制能力和宿主反应：人支气管上皮细胞和牛乳腺上皮细胞。虽然所有基因型在人体支气管上皮细胞中都能高效复制，但只有B3.13病毒在牛乳腺上皮细胞中表现出强效复制和广泛的宿主反应诱导。这些结果强调了A(H5N1) 2.3.4.4b谱系病毒在进化、组织嗜性和宿主适应性方面的差异，并突显了持续监督的必要性。这些结果强调了A(H5N1) 2.3.4.4b分支病毒在进化、组织嗜性和宿主适应性方面的差异，并凸显了对B3.13基因型病毒持续监测和密切关注的必要性。