高致病性禽流感（H5N1）病毒，属于2.3.4.4b类群，已在全球鸟类种群造成重大损失，并多次感染包括人类在内的哺乳动物，但未实现持续的人际传播。这里我们展示了于2024年在德克萨斯州从牛奶中分离出的H5N1病毒（H5N1Tex/24），在分化的人类鼻上皮细胞中复制效率与2009年流行的H1N1病毒株（H1N1 HH4/09）相当。），温度分别为37°C和33°C。 适应性突变PB2 M631L和PA K497R在33°C促进复制，但在37°C时对复制无影响。 一种H5N1病毒（H5N1BE/22）于2022年从一只鹈鹕中分离出来，该鹈鹕没有这些突变，在37°C下复制效率高，但在33°C下表现较差，这一限制并未被引入PB2 M631L和PA K497R突变所克服。分化的鼻上皮细胞培养表达了人类和禽流感病毒的受体。因此，没有检测到与受体特异性改变相关的HA突变。H5N1Tex/24 能够有效抑制干扰素-λ的产生，但仍然对这种细胞因子的抗病毒作用敏感。这些发现表明，H5N1Tex/24 具有在分化的人类上呼吸道细胞培养中高效复制的内在特性。