H5N1亚系2.3.4.4b对牛乳腺的非典型嗜性，可引发无明显呼吸道症状的坏死性乳腺炎，这引发了对其潜在机制的关键质疑。我们采用糖组学和连接特异性凝集素组织化学技术，分析唾液酸（SA）受体多样性与解剖分布特征；同时通过病毒结合实验和高分辨率电子显微镜（EM）观察病毒-受体相互作用。牛乳腺组织富含N-和O连接的SA糖苷，对亚系2.3.4.4b H5的结合亲和力显着高于亚系2.2 H5；相比之下，牛气管仅含O连接但不含N连接SA，且未检测到H5结合，表明气管上皮细胞缺乏可兼容的流感A病毒（IAV）受体。病毒结合组织的EM进一步证实了H5N1感染牛的受体基础。随着H5N1病毒继续感染非典型宿主（如首例羊感染病例所示），我们的研究提供了一套评估流感病毒易感性的方法框架。