自2024年3月起，美国奶牛中检测到H5N1高致病性禽流感（HPAI）。未经巴氏杀菌的牛奶中排泄的传染性病毒（此前尚未评估其作为H5N1检测基质的有效性）使得实时逆转录定量聚合酶链式反应（rRT-qPCR）检测成为动物诊断和食品安全筛查及早期发现的关键手段。本次实验室间比对试验评估了基于聚合酶链式反应（PCR）的H5N1检测方法的性能，采用45家政府、学术及商业实验室参与，使用添加了灭活H5N1病毒培养物的盲样牛奶，病毒浓度范围为每100微升85至17万基因组拷贝。参与者依据常规规程检测样本。采用按提取与PCR试剂盒组合分组的方法，分析检出率（ROD）、Ct值及50%样本呈阳性时的检测限（LOD50），以比较灵敏度差异。对于高浓度样本（17,000和170,000拷贝/100微升），检出率（ROD）≥99%；然而，低浓度样本的检出率显着下降，仅34%的参与者能在1,700拷贝/100微升的样本中可靠检出，而85拷贝/100微升的样本仅24%能被检出。参与者采用了八种不同的检测方法，其中部分方法能稳定检出低浓度病毒，而其他方法在低拷贝量下则完全无法检出。本研究揭示了各实验室在H5N1检测能力上的显着差异，方法选择直接影响灵敏度。这一发现对人类与动物健康监测及应急响应具有重要启示，凸显了评估H5N1牛奶检测方案及质量控制措施的必要性。