.3.4.4b类H5Nx高致病性禽流感病毒（HPAIV）在全球家禽中引起了广泛的爆发。H5高致病性禽流感病毒在中国引起了零星但严重的人类感染，构成了持续的人畜共患威胁。在这里，我们通过常规监测确定了一种鸭源H5N6 HPAIV（a/duck/Jiangsu/628/2022），并评估了其生物学特征和哺乳动物发病机制。系统发育分析显示，毒株628与同时存在的人类H5N6毒株A/扬州/125/2022之间的核苷酸同源性>98%。分子特征鉴定了多种哺乳动物适应标志物：与增强的人类受体结合相关的血凝素替代（S137A、T160A、T192I）；神经氨酸酶突变（I117T、D198N）与神经氨酸酶抑制剂敏感性降低有关；以及聚合酶复合物变化（PB1-D622G、PA-K142Q）导致哺乳动物细胞复制增加。体外研究表明，628病毒在哺乳动物细胞中的复制比在鸟类细胞中更有效，并表现出双重受体结合特异性。小鼠致病性检测显示，其毒性中等，肺部病理学呈进行性。关键的是，传播实验证实了628在豚鼠身上的直接接触和空气传播能力。这些发现表明，循环中的H5N6病毒在保持鸟类适应性的同时获得了部分哺乳动物适应性，显着提高了大流行的可能性。迫切需要加强对野生鸟类种群、家禽养殖场和活禽市场的监测，以制定有效的预防和控制策略。