一种称为K亚谱系的H3N2变种在2025-2026流感季节仍广泛传播。该病毒的血凝素（HA）蛋白相较于北半球2025-2026 H3N2疫苗株的HA有十一处替换。这些替换中许多位于已充分研究的HA抗原位点上的表位。尽管如此，中期疫苗有效性研究显示，2025-2026年流感疫苗对H3N2 K亚谱系感染提供中等保护。我们之前报告称，许多接种2025-2026年流感疫苗的人产生了抑制H3N2 K亚谱系病毒细胞附着的抗体。在此，我们展示了这些个体还产生了中和H3N2 K亚谱系病毒感染的抗体，并观察到血凝抑制（HI）滴度与中和抗体滴度之间存在较强相关性。我们使用来自有或没有交叉反应H3N2亚群K病毒抗体的个体的样本完成了额外的特异性研究。通过高通量中和测定，我们确定了结合疫苗株但不结合H3N2亚群K病毒的抗体通常针对HA的抗原位点B。相反，我们发现疫苗诱导的交叉反应中和抗体通常以HA的抗原位点A、D和E为靶，这些位点在疫苗株与H3N2 K亚分支病毒之间是保守的。基于电子显微镜的多克隆表位图谱研究进一步证实，疫苗诱导的交叉反应抗体通常靶向HA侧面的表位。综合来看，我们的研究为2025-2026年度流感疫苗对抗原性进化的H3N2 K亚分支病毒部分有效提供了免疫学解释。我们的数据表明，未来季节的疫苗株需要谨慎选择，因为K亚分支病毒已经开始在交叉反应抗体靶向的HA抗原位点上获得额外的突变。