2.2类群 H5N1类流感病毒引发了异常多的人类感染，为研究宿主适应早期分子步骤提供了独特机会。尽管大多数研究聚焦于血凝素（HA），但神经氨酸酶（NA）对这些早期适应性事件的贡献仍不明确。通过分析2.2类群感染患者的公开序列，我们识别出20个NA突变，并将其表型与20个在无药物条件下人类原级气道细胞多样化过程中获得的突变进行了比较。大多数患者来源的NA突变导致唾液苷酸酶活性适度降低，保持活性在支持α2,6唾液糖链（α2,6 Sia）优势环境中复制改善的功能范围内，而过度减少则损害适应度。值得注意的是，培养选择与患者衍生突变的表型高度一致，表明这些NA变化是通过自然选择而非抗病毒压力引起的。对患者序列的重新分析进一步显示，许多适应性NA突变与仅赋予弱部分α2,6 Sia结合的HA突变共存。利用逆向遗传学，我们发现这些自然存在的HA/NA突变对以受体-情境依赖性方式协同作用，支持α2,6相关复制，相较于仅HA的突变体，使这些变异处于一个受限的“早期适应空间”，其特征是α2,6的结合有限且NA活性中度降低。综合这些发现表明，早期人类对2.2类群H5N1的适应不仅涉及HA和PB2，还涉及NA功能的渐进式合作调谐。因此，协调的HA–NA演化监测有望改善处于人类宿主适应早期阶段的人畜共患流感病毒的风险评估框架。