H5N1亚型高致病性禽流感病毒（HPAIV）对动物和公共卫生构成重大威胁。目前H5进化枝2.3.4.4b的泛动物病已经在各种家禽和野生鸟类中引起了大量广泛的爆发，死亡率高，损失巨大，并且对奶牛等意外的新型哺乳动物宿主的溢出事件频率很高。全球H5N1疫情引起了人们对哺乳动物间有效传播导致的人畜共患风险的严重担忧。因此，提高扩大物种范围的监测强度至关重要，特别是在人-动物界面。为此，迫切需要易于执行且适合高通量筛查的可靠且具有成本效益的血清学工具。采用基于发光的检测技术的新开发的双抗原ELISA格式已证明符合这些先决条件。该测定法允许在包括人类在内的多种鸟类和哺乳动物感染或接种疫苗后早期检测H5特异性抗体。它进一步证明了针对进化枝2.3.4.4b的H5血凝素的抗体具有优异的分析灵敏度和高特异性，因为未观察到与其他血凝素亚型的交叉反应。因此，该测定代表了对现有血清学诊断测试的有价值的贡献，用于在广泛物种中对甲型流感病毒抗体进行进化枝优化检测。