美国农业部通过全基因组序列证实首次在奶牛中检测到HPAI H5N1进化枝2.3.4.4b基因型D1.1。虽然基因型D1.1是北美候鸟中流行的主要毒株，但内华达州病例代表了首次在牛中检测到B3.13以外的基因型，以及第二次已知的野生鸟类向泌乳奶牛的溢出事件。D1.1与HPAI B3.13相比，内华达州和亚利桑那州奶牛群的临床表现较轻。然而，这是基于少数受影响的牛群，对于更广泛的人群来说可能不是这样。在这里，我们试图通过实验复制HPAI H5N1基因型D1.1的奶牛感染。并试图确定自然感染HPAI B3.13后血清抗体的牛是否受到HPAI D1.1再感染的保护。将四头成年荷斯坦奶牛转移到ABSL-3-Ag生物安全实验设施中，两只奶牛没有感染甲型流感病毒；另两只奶牛没有感染甲型流感病毒，但血清抗体来自天然H5N1感染（基因型B3.13）。所有奶牛通过乳房内途径接种1毫升1×105.4 TCID50/毫升A/奶牛/内华达州/24-002644-003/2025到两个对侧。在这项研究中观察到的产奶量和反刍的下降与HPAI B3.13泌乳奶牛的实验性乳房内攻击以及自然感染中报道的相似，表明HPAI D1.1的临床表现在严重程度上与HPAI B3.13的实验性攻击相似。与HPAI B3.13乳房内挑战不同，HPAI D1.1迁移并感染了未接种的四分之一。这两头B3.13恢复期奶牛很容易再次感染D1.1，表现出临床症状，包括产奶量下降和反刍，发热和乳腺炎。然而，两头恢复期奶牛的产奶量和瘤胃运动恢复得比两头初生奶牛更快，发热也不那么严重。在10 DPI后，在恢复期奶牛的牛奶中也未检测到病毒RNA，而在研究期间，在普通奶牛的牛奶中检测到了病毒RNA。此外，虽然在两只恢复期奶牛的牛奶中检测到病毒RNA，但没有分离出活病毒。虽然有血清但没有针对B3.13的牛奶抗体的恢复期奶牛很容易再次感染D1.1，而临床疾病抗体可以渗入牛奶并结合病毒，可能会阻止整个牛群的进一步传播。从以前未感染的奶牛的牛奶中回收的全基因组序列病毒的单核苷酸变异分析也发现了一些潜在的重要模式。发现HA和MP基因具有强有力的自然选择证据，分析表明，通过一些可能导致抗原漂移和免疫逃逸的关键突变赋予了适应性优势。