为了研究中国江苏省流行的H3N2犬流感病毒的分子特征，我们在南京农业大学兽医教学医院从一只出现呼吸道症状的狗中分离出一株H3N2毒株（a/canine/Nanjing/CnNj01-2025）。对所有八个基因片段进行测序，并与两个人类H3N2菌株和五个禽类H3N2菌株的基因片段进行比较。还评估了抗原性和受体结合特性。系统发育分析表明，犬分离株来自禽类谱系并形成独立的进化进化进化枝，而人类毒株与禽类谱系的亲缘关系更远。HA蛋白的糖基化分析表明，犬品系携带7个N-糖基化位点，包括残基97/81（HA/H3编号）的独特位点，其作为犬品系的分子标记。在主要抗原位点鉴定出几个氨基酸取代，包括D97/81N，A176/160T，N204/188D，V212/196I和W237/222L。内部基因分析表明，犬株携带PB2 292T和590S哺乳动物适应突变，这些突变也存在于人类品系中。犬株的血凝抑制（HI）测定表明与人H3N2抗血清具有中等的血清学交叉反应性（减少16倍），而禽株则没有交叉反应性。受体结合试验表明，该病毒保留了主要的α-2,3唾液酸结合，与禽流感病毒相当，并且对人型α-2,6唾液酸受体具有适度的亲和力。因此，犬H3N2病毒经历了显着的抗原漂移，与人类菌株产生了部分血清学交叉反应，并获得了对人类受体的可检测但有限的结合亲和力。总体而言，我们的研究结果表明，目前的犬H3N2流感病毒表现出与人和禽流感病毒株不同的遗传和抗原变异。因此，有必要对犬流感病毒进行持续的分子和血清学监测，以监测其进化趋势并评估跨物种传播的潜力。