高度致病性禽流感H5N1在2024年3月以来，随着其在乳牛及相关人类感染中溢出，带来了日益增长的公共卫生风险。我们系统地识别了在鸟类传牛过程中出现的关键PB2突变及其后续适应，尤其是PB2 M631L，其致病性在小鼠中与经过充分描述的PB2 E627K突变相当。回顾性分析显示，PB2 631L在2013-2014年柬埔寨和越南的H5N1病毒株中也曾在禽类和人类H5N1株中流行。其他适应性突变还包括已建立的标志物（E627K、Q591R、D701N）和新型变异（I647V、G685R、K736R）。这些突变通过改善牛和人类ANP32A蛋白的利用，增强聚合酶活性，从而提升哺乳动物的病毒适应性和致病性。这些适应的汇聚凸显了牛适应型H5N1病毒人畜共患风险的升高，并凸显了对禽类和哺乳动物宿主加强监测的紧迫需求。