甲型流感病毒（IAV）的有效复制需要血凝素（HA），神经氨酸酶（NA）和RNA聚合酶复合物的平衡活性，其功能受PB2突变的强烈影响。我们之前揭示了PB2突变的三种不同的进化途径，其中两种途径导致出现导致人类季节性感染和2009年大流行的病毒株，第三种途径产生H5Nx高致病性禽流感病毒（HPAIV），由三联突变（I147T，K339T和A588T）定义，偶尔会扩散到人类。在这里，我们调查了这种三联征造成的人畜共患风险，并阐明了其与HA，NA和疫苗接种的进化关系。携带三联体的重组PR8和进化枝2.3.2.1c H5N1病毒在含胚鸡蛋中有效复制，在哺乳动物细胞中具有中等复制效率；此外，与携带E627K的菌株感染的小鼠相比，感染这些病毒株的小鼠表现出较轻的体重减轻和较低的肺滴度。H5Nx病毒的序列分析显示，三联征在不同基因型中的早期出现和长期持续存在，这与HA糖基化和NA茎截短密切相关。然而，在连续的H5家禽疫苗接种运动之后，这些病毒株的流行率显着下降。这些数据表明，三联征提供了与家禽和哺乳动物宿主兼容的复制优势，但仅赋予中等程度的哺乳动物致病性，并且持续接种疫苗可以抑制具有这些突变的病毒株的传播。PB2与HA和NA的持续分子监测对于预防H5Nx人畜共患威胁仍然至关重要。