H9N2目前是感染人类的第二大最常见的甲型禽流感病毒亚型。监测病毒对人类的表型和基因型适应对于风险评估至关重要。在这里，我们比较了2024年收集的H9N2人类分离株（A/HK/2346/2024）与1999年收集的历史人类分离株（A/HK/1073/1999）的复制。在Madin-Darby犬肾（MDCK）细胞中，A/HK/2346/2024和A/HK/1073/1999分别复制至每毫升8个log10和5个log10噬菌斑形成单位（PFU）。在人类鼻和肺类器官中，A/HK/2346/2024复制至6 log10 PFU/ml，但A/HK/1073/1999未能在任一类器官中复制。A/HK/2346/2024的纤毛细胞和非纤毛细胞的感染率均高于A/HK/1073/1999，A/HK/2346/2024的感染2,6/2,3细胞的比例也较高。除了在症状发作后第1天（pso）收集的鼻咽标本中存在的哺乳动物适应性替代（HA-D183N/D190 T/Q192R/Q226L；NA-del62-64；PB2-A588 V/K702R；PB1-I368 V；PA-K356R/S409N；M1-R95 K），哺乳动物适应性替代PB2-D253N在第7天pso从头出现。分析所有人类（n?=?96) 和禽流感（n?=?14762) 存放在GISAID的H9N2显示了近年来从人类收集的H9N2菌株中几种人类适应替代的优势。总之，我们证明了最近的H9N2病毒更适合人类，并且能够在上呼吸道和下呼吸道中复制到高滴度，这可能赋予更高的人与人之间的传播性和毒力。我们的研究强调了基于人类类器官的表型监测和宿主间/宿主内基因型监测对于评估禽流感病毒人畜共患风险的重要性。