欧亚禽流感样H1N1猪流感病毒（EA H1N1）与人类大流行2009 H1N1病毒（2009/H1N1）之间的抗原关系仍然是流感监测和疫苗效力的关键问题。本研究系统地研究了毒株A/猪/天津/312/2016（TJ312，EA H1N1）和A/广东茂南/SWL1536/2019（GD15362009/H1N1）之间的抗原差异。交叉血凝抑制（HI）测定显示出显着的抗原差异，异源与同源HI滴度降低了16倍。比较序列分析确定了HA1亚基的五个主要抗原位点（Sa，Sb，Ca1，Ca2和Cb）之间的22个氨基酸差异。使用反向遗传学，产生了一组突变病毒。这项研究表明，Sa抗原位点残基128（H3编号）处的单个组氨酸（H）-天冬酰胺（N）取代是抗原变异的主要决定因素，足以引起HI滴度的四倍变化和可测量的抗原距离漂移。通过AlphaFold3和PyMOL软件进行的结构建模表明，H128N突变可能会改变抗原位点的局部构象。128位的H可能会与相邻的氨基酸产生静电排斥，而N可能会促进与相邻残基的氢键形成。这些相互作用可能会导致抗原位点的结构变化。我们的研究结果证实，残基128是EA H1N1和2009/H1N1病毒抗原分化的关键分子标记。该研究强调了监测特定HA突变的必要性，这些突变可能会降低交叉反应性，并为完善疫苗株选择和大流行防范策略提供了宝贵的见解。