A/goose/Guangdong/1/96谱系H5N1高致病性禽流感（HPAI）病毒的全球传播伴随着宿主范围的扩大和奶牛之间持续病毒传播的建立。为了评估进化中的H5N1病毒是否随着时间的推移改变了组织趋向性，我们比较了来自进化枝1（A/Vietnam/1203/04，H5VN）和循环进化枝2.3.4.4b病毒的重组血凝素（HA）蛋白的结合模式。野生鸟类（A/Eurasian Teal/Hong Kong/AFCD-HKU-23-14009-01020/2023，H5HK）和奶牛（A/bovine/Ohio/B24OSU-439/2024，H5OH）。包括A（H1N1）pdm09病毒的HA蛋白用于比较。使用生物层干涉法，H1蛋白优先与α2,6连接的唾液酸苷6´SLNLN结合，而H5蛋白优先与α2,3连接的唾液酸苷3´SLN结合。H5OH对3´SLN的结合亲和力高于H5HK和H5VN。评估了H1和H5蛋白在不同物种和奶牛乳腺的呼吸组织上的附着模式。与H1蛋白相比，H5蛋白与猫，牛，鸡，雪貂，人和猪的肺上皮细胞表现出更强的结合，进化枝2.3.4.4b H5蛋白与猪和牛支气管上皮细胞的结合增强。所有H5蛋白都附着在乳腺的肺泡和水箱上皮细胞上，其中α2,3连接的和α2,6连接的唾液酸聚糖分别由Maackia amurensis凝集素II和接骨木黑凝集素检测到。综上所述，进化枝1和2.3.4.4b H5N1病毒的HA蛋白通常与禽类和哺乳动物组织具有可比的附着模式，尽管在过去的30年中进化成抗原性不同的进化枝。