欧亚类禽流感（EA）H1N1猪流感病毒（SIV）具有引发下一次流感大流行的能力，因为它对人类α-2,6唾液酸（SA）受体的亲和力增强。然而，EA H1N1 SIV受体结合偏好转换的分子机制仍然难以捉摸。在这项研究中，我们利用EA H1N1 SIV在猪肾细胞中进行了全面的全基因组CRISPR/Cas9敲除筛选。敲除γ-谷氨酰羧化酶（GGCX）通过抑制病毒血凝素（HA）的羧化修饰和子代病毒的粘附来减少病毒在体外和体内的复制，最终阻碍EA H1N1 SIV的复制。此外，GGCX被发现是EA H1N1 SIV D225E替代的决定因素，GGCX药物化的HA 225E羧化修饰有助于EA H1N1 SIV对α-2,6 SA受体的受体结合适应。综上所述，我们的CRISPR筛选阐明了GGCX在支持EA H1N1 SIV适应与α-2,6 SA受体结合方面的新功能。因此，GGCX成为对抗EA H1N1 SIV感染和传播的潜在抗病毒靶点。