2.3.4.4b分支H5N1禽流感病毒正在美国奶牛中引发前所未有的疫情。为了了解最近的H5N1病毒是否正在改变其受体用途，我们使用聚糖微阵列从历史和最近的2.3.4.4b H5N1病毒中筛选重组血凝素（HA），以结合不同的带有末端唾液酸的聚糖。我们发现，与历史和最近的2.3.4.4b H5N1病毒相比，来自A/Texas/37/2024的H5（奶牛疫情中的一种分离株）与携带末端α2,3唾液酸的核心聚糖（鸟类受体）的结合宽度增加了。我们没有观察到与人类季节性流感病毒使用的受体α2,6唾液酸的任何结合。使用分子动力学和A/Texas/37/2024 H5的低温EM结构，我们发现与2022年的2.3.4.4b H5相比，A/Texas/37/20024 H5在受体结合位点内更灵活。我们发现受体结合位点外的一个突变T199I负责增加结合宽度，因为它增加了受体结合位点的灵活性。这些数据共同表明，最近的H5N1病毒正在进化增加受体结合宽度，这可能会影响感染H5N1的宿主范围和细胞类型。